原來這就是活化素Aelisa試劑盒的測(cè)定步驟

　　活化素Aelisa試劑盒檢測(cè)目的：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人心型脂肪酸結(jié)合蛋白（h-FABP）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人心型脂肪酸結(jié)合蛋白（h-FABP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

　　活化素Aelisa試劑盒的測(cè)定步驟：

　　1、加樣

　　①除包被外都需45度加樣

　　②加樣體積要準(zhǔn)確

　　③管底加樣，不能加在管壁上

　　④加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡

　　2、溫浴

　　①加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。

　　②各ELISA板不應(yīng)疊在一起。

　　③為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。

　　④加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便不時(shí)觀察，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng)。

　　3、洗滌

　　①洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。

　　②目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

　　4、讀板

　　①陰性對(duì)照顏色極淺，在定性測(cè)定中一般可采用目視比色。

　　②如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì)量和軟件的算法。